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细菌染色液在操作上都需要哪几个步骤?
发布时间:2019-03-11   点击次数:38次
  细菌染色液是微生物实验中观察细菌形态结构以及掌握细菌代谢、繁殖等情况的常用普及技术。为进一步提高实验中细菌形态的观测质量,本文就对常用细菌染色液进行了改良,据实验结果显示,其改进后方法操作更加简单,更有效起到细菌染色作用及观测作用。
 
  细菌染色液的原理:
 
  细菌经结晶紫初染染成蓝色。革兰氏染色阳性菌(G+)细胞壁肽聚糖层数多,且肽聚糖为空间网状结构,再经乙醇脱水,网状结构更为致密,染料复合物不易从细胞内漏出,仍为蓝色。而革兰氏染色阴性菌(G-)细胞壁脂类含量多,肽聚糖层数少,且肽聚糖为平面片层结构,易被乙醇溶解,使细胞壁通透性增高,结合的染料复合物容易泄漏,细菌被脱色为无色,再经石炭酸复红稀释液复染成红色。

  细菌染色液的操作步骤:
 
  载玻片清洗――选择新的光滑无划痕的载玻片,浸泡于洗洁精充分溶解的水中,煮沸20min,稍冷后取出用自来水冲洗干净并沥干,然后浸泡于95%乙醇溶液中。用时取出,在酒精灯火焰上烧去酒精后即可使用。
 
  菌液制备――将分装于试管中的无菌水缓慢地倒人经4~5代转接培养的斜面培养物中,不要摇动试管,让菌体在水中自行扩散。注意蒸馏水预先在恒温培养箱中保温,使之于与菌种同温。置于恒温培养箱中保温10min。目的是让没有鞭毛的老菌体下沉,而具有鞭毛的菌体在水中松开鞭毛。
 
  涂片――用吸管从菌液上端吸取菌液于洁净的载玻片一端,稍稍倾斜玻片,使菌液缓慢地流向另一端。
 
  干燥――在空气中自然干燥。
 
  染色――滴加硝酸银染色液A液,染色4~6min;用蒸馏水轻轻地充分洗净A液。用B液冲去残水,再加硝酸银染色液8液于玻片上。用酒精灯微火加热至有蒸汽冒出,维持1mm左右。注意加热时应随时补充B液,不可使玻上B液蒸干。用蒸馏水冲洗,干燥。

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