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DAB染色液操作时怎样配制与显色?
发布时间:2018-12-21   点击次数:79次
   DAB染色液成分:抑制剂、通用HRP多聚体、DAB显色剂、DABH2O2、铜。产品有效期:2-8℃,10个月。附件:注册产品标准,产品说明书。
  
  适应症:该产品是一种间接的不含生物素的系统,用于检测鼠抗IgG、IgM和兔源性一抗。对常规经福尔马林固定,石蜡包埋的组织和冰冻组织切片中的靶抗原进行检测。
  
  DAB染色液的注意事项:
  1.DAB有潜在致突变作用,操作时应注意穿戴好防护用具。
  2.DAB溶液应低温密封保存。如有结晶析出,应确保结晶完全溶解再行使用;
  3.显色工作液应现用现配,新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色,如颜色过深,请勿使用;
  4.DAB在常温下不稳定,每次取用后均应及时加盖密封放回冰箱,以免因DAB分解影响实验,或因渗漏造成实验环境污染;
  

  DAB染色液的使用方法:
  1.DAB显色液配制
  10mMTris-HCl(pH7.6)9mL+DAB(diaminobezidin3,3-二氨基联苯胺)+0.3%(W/V)NiCl2或CoCl21mL,显色时加入5-10mL30%H2O2混匀后立即使用。
  2.显色
  准备好含有待测蛋白的固相膜:包括电泳、转印、封阻、一抗(或生物素)处理、辣根过氧化酶(HRP)标记的二抗(或链霉亲和素)处理、清洗等步骤。
  3.加入适量的DAB显色液,铺满整个固相膜表面(可按比例增减)。
  4.置于平式摇荡仪上,在室温下孵育2至5分钟,避免光照(暗室操作),直至棕褐色沉淀出现。
  5.用镊子夹起固相膜,放进无离子水里清洗。
  6.空气中晾干。
  7.拍照记录。

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