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非洲猪瘟定点清除技术中的应用以及采样

  非洲猪瘟疫情严重影响了我国的生猪生产和肉食供应,造成了养猪行业的极大灾难。纵其原因,虽然众说纷纭,但检测方法的失当是导致疫情泛滥的重要原因之一。

  国际上通用的非洲猪瘟血液学检测方法是完全错误的,采血过程的污染程度是不可估量的,检测操作过程是极其危险的,同时血液学检测结果也是严重滞后的。非洲猪瘟病毒的感染分为两个重要阶段:局部感染和全身感染。前者主要发生在口腔等咽喉部位(有时鼻腔也会被污染),后者则形成严重的病毒血症。这两个阶段并不是缺一不可的,多数猪群往往仅仅发生局部感染。若饲养管理方法不科学,则最终形成全身感染,发生严重的非洲猪瘟临床症状。通过加强管理,将感染限制在局部感染阶段是实现安全生产的重要保证。

  口腔内局部感染阶段也是非洲猪瘟窗口期检测的重要时机,是实现传染病控制原则“早、快、严、小”的重要保证。探索非洲猪瘟唾液学检测方法具有重要的科学指导意义和生产实践意义。

  1)唾液样本的采集:获得新鲜的唾液(saliva)样本是准确诊断的前提条件之一。现行的鼻拭子(nasalswab)采样、口腔拭子(oralswab)采样以及肛门拭子(analswab)采样存在样本陈旧、样本容易干燥、漏检率高等问题,已被逐渐淘汰。

  2)唾液样本中的病原半衰期:唾液中含有丰富的具备活性的酶。机体健康状态不同,酶的含量也千差万别,从而导致唾液中的病原体半衰期(half-lifeperiod)长短不一,对于非洲猪瘟病毒来说,长者2~3天,短者1~2小时不等。病原半衰期的存在是导致唾液学非洲猪瘟病毒漏检率稍高的重要因素之一。

  3)唾液样本的核酸保护:采集唾液样本之前加入适量的样本保护剂(SampleProtesis?),可以延长病原半衰期并保持唾液活性,含有保护液的唾液样本可以冷藏/冷冻运输及保存。

  4)唾液样本的检测要求:采集的唾液样本要求清亮、透明并不得含有食物残渣,故采样之前的停食至关重要,原则上要求停食12小时以上。含有保护液的唾液中的核酸可以采用浓集法(concentrationmethod)检测,即离心唾液,试管底部取样。

  5)唾液样本检测对试剂盒的要求:由于口腔内的非洲猪瘟病毒感染往往处于初始阶段,病原核酸含量相对较低(CT值在25~30之间,未加保护液的唾液样本CT值往往在32以上),所以对非洲猪瘟病毒核酸检测试剂盒的敏感性要求较高,要求尽量能够实现单拷贝(singlecopy)检测。

  6)阳性结果处置:对于唾液检测中非洲猪瘟阳性结果(+),存在两种处置方案。一是严格剔除(“拔牙”,stampout)阳性猪只,实现净化生产。二是控制阳性猪群的移动,尝试实施早期带毒生产(局部感染而非病毒血症),最终实现净化生产。

  很多养猪科技工作者把带毒生产简单理解为血液中可以带毒是非常危险的,也是绝对禁止的。只有控制局部感染才有净化猪群,消除病毒携带状态的可能性。

  总之,非洲猪瘟是一种缓慢传播的接触性感染性疾病,从窗口期感染到全身性感染(病毒血症)需要具备一定的条件,较长的窗口期呈现也为净化非洲猪瘟提供了防控时机。其中,唾液学的非洲猪瘟病毒检测是实现早期净化的重要方法之一,建议推广使用。

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